本发明公开了一种用于分离旱獭组织中布鲁氏菌的培养基及其制备方法。具体由琼脂、胰蛋白月示、氯化钠、无水亚硫酸钠、酵母提取物、牛肝浸粉、D‑葡萄糖、赤藓糖醇、枸橼酸钠、特级马血清、杆菌肽、放线菌酮及蒸馏水或双蒸水组分构成。该培养基是一种能够对布鲁氏菌进行培养的固体培养基，营养加均衡；所添加的组分即满足了布鲁氏菌的代谢需求的碳源、氮源等，又抑制污染样品中其他细菌的生长，提高污染样品中布鲁氏菌的检出率；各组分之间相辅相成，达到协同增效的作用；本发明提供的培养基能够满足自喜马拉雅旱獭组织中分离布鲁氏菌的生长繁殖需求，具有质量稳定、制备简便和培养菌数高的优势。